Promotie B. (Baubek) Spanov

Bioanalytical methodology to study the in vivo biotransformation of therapeutic proteins

Modificaties in de therapeutische monoclonale anti-lichamen trasuzumab en pertuzumab

Therapeutische eiwitten (TE) zijn een belangrijke klasse van pharmacutische middelen voor de behandeling van een aantal ernstige ziekten. TE hebben een hoge specificiteit en geven minder ongewenste bijwerkingen dan traditionele kleine moleculen. De variëteit aan chemische en enzymatische modificaties die plaatsvinden tijdens de expressie, opzuivering en langetermijnopslag hebben een significante bedrage aan de heterogeniciteit van de TE. De toegenome heterogeniciteit leidt tot extra uitdagingen aan de analytische methoden om de sequentie en structuur van de TE te identificeren, karakteriseren en quantificeren.

Het onderzoek van Baubek Spanov was erop gericht analytische methodologie te ontwikkelen om modificaties  te bestuderen die plaatsvinden in de therapeutische monoclonale anti-lichamen trasuzumab en pertuzumab bij in-vitro blootstelling aan stressvolle omstandigheden en in-vivo biotransformatie. Het bestuderen van in-vitro modificaties en in-vivo biotransformatieprodukten met LC-MS heeft vooral een krachtige scheidingsmethode nodig. Een pH-gradiënt cation-wisselingschromatography kan aan deze eisen voldoen. Het gebruik hiervan bij de analyse van ladingsvarianten wordt in verschillende hoofdstukken van zijn proefschrift getoond. Bottom-up LC-MS is een breed gebruikte benadering voor de identificatie en karakterisatie van modifcatiesites in eiwitten. Hij gebruikte uitvoerig de bottom-up benadering om modificaties te koppelen aan de corresponderende proteofroms. Naast scheiding en karakterisatie is het belangrijk te begrijpen hoe de verschillende typen modificatie, veroorzaakt door blootstelling aan stress, in-vitro de therapeutische mAbs kunnen beïnvloeden. Om dit te bepalen zijn de bindings karakteristieken van gestressed trastuzumab en pertuzumab bepaald ten opzichte van de doelreceptor en verschillende typen van de Fcy-receptor zijn bestudeerd.

Promotors: prof. dr. R.P.H. Bischoff, prof. dr. N.C. van de Merbel