Development and use of engineered peptide deformylases in chemoenzymatic peptide synthesis

Promotie: mw. C. di Toma, 12.45 uur, Academiegebouw, Broerstraat 5, Groningen

Proefschrift: Development and use of engineered peptide deformylases in chemoenzymatic peptide synthesis

Promotor(s): Prof.dr. D.B. Janssen

Faculteit: Wiskunde en Natuurwetenschappen

Nieuwe zuivering verbetert industriële eigenschappen van peptide-deformylase

Het proefschrift beschrijft onderzoek naar het gebruik van peptide-deformylase (PDF) in chemo-enzymatische peptidesynthese.

Doel van het onderzoek was het verbeteren van methoden om PDF industrieel toe te passen. Daarbij ging het vooral om het ontwikkelen van een nieuwe zuiveringsmethode om eiwitten met peptidase-activiteit te verwijderen van PDF. Er werd aangetoond dat het gebruik van enzyme-engineering in combinatie met anion-exchange chromatografie een kostenefficiënte en industrieel toepasbare zuiveringsmethode is.

In het onderzoek zijn ook ander aspecten meegenomen, zoals het vergroten van de stabiliteit en het aanpassen van de substraatspecificiteit. Voor het verbreden van de specificiteit van PDF werd mutagenese gebruikt. In het onderzoek is een analysemethode ontwikkeld waarmee de verbeterde PDF-varianten sneller in E. coli-kolonies kunnen worden geselecteerd. Verschillende klonen die de nieuwe substraat -specificiteit vertonen, werden teruggewonnen, gesequenceerd en gedeeltelijk gekarakteriseerd.

C. di Toma (Italië, 1979) studeerde medische biotechnologie in Triëst. Het onderzoek werd uitgevoerd bij DSM Geleen en gefinancierd door dezelfde firma. Di Toma werk nu bij Merck Millipore.